Réalisation pratique d'une réaction de PCR
Pour réaliser une réaction de PCR, il faut établir le mélange réactionnel suivant :
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Il existe différents types de TAQpolymérase commercialisés. Elles sont protégées par des brevets. Elles présentent des fiabilités, des vitesses de synthèse et donc des coûts différents.
Une TAQpolymérase "classique" synthétise 2000 bases par minute pour un coût compris entre 0,1 et 0,5 euros par réaction de PCR.
Il faut tenir compte de la vitesse de synthèse d'ADN pour déterminer la durée de l'étape de polymérisation de l'ADN réalisée à 72°C.
Méthode :
La réaction de PCR est réalisée grâce à un appareil appelé thermocycleur.
Un thermocycleur n'est rien d'autre qu'un bain marie perfectionné qui peut changer rapidement de température pour respecter les consignes de température et de durée choisies par l'expérimentateur.
Pour plus d'informations, une vidéo est à votre disposition :
